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免疫沉淀與免疫共沉淀:定義、應用領域、優缺點及常見問題詳解

2024-01-18 09:37:47

***、引言


 


在生物學和醫學研究中,免疫技術已經成為***種重要的研究工具。其中,免疫沉淀(Immunoprecipitation)和免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是兩種常用的技術,它們在探索蛋白質相互作用、定位蛋白質復合物等方面發揮著至關重要的作用。本文將對這兩種技術的定義、應用、優缺點以及常見問題進行解析。



免疫沉淀:免疫沉淀(immunoprecipitation)是指利用抗體可與抗原特異性結合的特性,將抗原(常為靶蛋白)從混合體系沉淀下來,初步分離靶蛋白的***種方法。它通常用于蛋白質的純化和富集,以便進行后續的分析,如蛋白質譜分析或Western blot。


 


免疫共沉淀:免疫共沉淀(co-immunoprecipitation)是***種用于檢測兩種或多種蛋白質之間相互作用的技術。當***種蛋白質與特異性抗體結合后,可以通過共沉淀的方式將與之相互作用的蛋白質***同沉淀下來。


 


三、應用


 


(1)免疫沉淀(IP)***般可用于以下的研究分析


 


1.磷酸化位點分析


 


2.激酶活性分析


 


3.乙酰化位點發現與鑒定


 


2)免疫共沉淀(Co-IP)***般可用于以下的研究分析


 


1.利用質譜鑒定相互作用蛋白


 


2.蛋白相互作用的驗證


 


3.缺失分析聯合co-IP進行蛋白互作結構域分析


 


4.測定兩種目標蛋白質是否在體內結合


 


5.確定***種特定蛋白質的新的作用搭檔


 


6.分離得到天然狀態的相互作用蛋白復合物


 


四、優缺點


 


免疫沉淀:優點在于特異性高,能夠有效地將目標蛋白與其他蛋白分離;缺點是需要大量的抗體和較長的實驗時間。


免疫共沉淀:優點在于能夠直接檢測蛋白質間的相互作用,且操作相對簡單;缺點是可能會受到非特異性結合的干擾,導致結果出現偏差。


 


五、常見問題解析


 


(1)免疫共沉淀中的input是指什么?


 


input是陽性對照。免疫共沉淀實驗中,會直接取細胞裂解液進行WB,用于驗證細胞裂解液中確實存在目的蛋白,即陽性對照。


 


(2)如何避免重鏈,輕鏈的影響(點擊此鏈接詳述)?


 


設計合適的IP實驗;


選擇合適種屬的抗體;


選擇特異性識別重鏈/輕鏈的二抗。


 


(3)Input對照組出現假陰性結果?


 


裂解液過于劇烈,采用溫和的裂解條件;


選擇目的蛋白或相互作用蛋白含量低的樣品:過表達提高目的蛋白的含量,進行免疫共沉淀。


 


六、結論


 


總的來說,免疫沉淀和免疫共沉淀是兩種強大且常用的免疫技術,各自具有獨特的優勢和局限性。了解這兩種技術有助于我們更準確地理解和應用它們。在未來,隨著生物技術的發展,這兩種技術也將會更加完善,為科學研究提供更多的可能性。


(文章來源于儀器網)


(來源:


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