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ELISA vs WB,怎么選?牢記這幾點

2024-09-26 09:28:29

蛋白質(zhì)分析和鑒定方法***常用的就是ELISA和Western Blot(以下簡稱WB),那到底該選哪種呢?

ELISA簡單,還是WB簡單?

是不是二選***就可以了?

ELISA和WB都是基于抗原-抗體特異性結(jié)合的原理,主要區(qū)別在于:

  • ELISA對于抗原、抗體都能檢測

  • WB則主要檢測抗原













此外,了解這兩種方法的優(yōu)缺點,即可輕而易舉地解決如何選擇的問題。

ELISA


靈敏度高、應(yīng)用領(lǐng)域廣泛,檢測樣本濃度可低至pg/ml,操作相對簡單,用于確定樣品中是否存在蛋白質(zhì)的高效方法,亦可精確定量蛋白質(zhì)的濃度。

ELISA 具有包被、封閉、檢測、 結(jié)果讀取4個常規(guī)操作步驟,有直接、間接、夾心及競爭檢測4種主要類型。

ELISA直接、間接、夾心檢測示例

ELISA標(biāo)準曲線示例

ELISA的優(yōu)缺點

優(yōu)點:適合體液(血清、尿液等)、細胞上清樣本;靈敏度高,操作簡單、高效、快速(1-2h),需樣品量較少,可以同時進行多個樣本分析。另外,也可靈活地DIY 檢測試劑盒,即可降低成本,又解決了實驗需求;同時ELISA可搭配實驗室高通量或自動化設(shè)備,實現(xiàn)自動化操作。

缺點:實驗操作過程中,由于操作問題、樣品污染、使用低質(zhì)量試劑等原因,其特異性方面經(jīng)常受到影響,可能會產(chǎn)生假陽性或假陰性結(jié)果;此外試劑盒中的抗體組分須低溫運輸、儲存;ELISA無法提供有關(guān)目標(biāo)蛋白的質(zhì)量和豐度等其他信息。

Western Blot


是***種通過電泳、轉(zhuǎn)膜、抗體孵育、成像等步驟對目標(biāo)蛋白進行檢測的方法,操作流程相對復(fù)雜,用于識別和了解蛋白質(zhì)的***些特征元素、蛋白質(zhì)相互作用和修飾等,可提供目標(biāo)蛋白的詳細信息,如蛋白質(zhì)大小豐度等,也常被用于ELISA和其他檢測方法結(jié)果的驗證,它可以有效地幫助排除假陽性或假陰性的結(jié)果。

Western Blot的優(yōu)缺點

優(yōu)點:適用于組織或細胞裂解液樣本;檢測結(jié)果簡單易懂;特異性高,能夠從多種蛋白質(zhì)中識別目標(biāo)蛋白;可提供目標(biāo)蛋白的分子量、表達豐度等信息;熒光Western Blot,可以在***個實驗中進行多重檢測,檢測多種蛋白質(zhì)。

缺點:傳統(tǒng)操作步驟繁瑣、耗時(1到2天),體系如果沒有優(yōu)化,容易出現(xiàn)信號衰減快、高背景等情況,導(dǎo)致不理想的檢測結(jié)果;同時檢測靶蛋白的數(shù)量受限于***抗和二抗的組合;通常被用作驗證方法

使用iBright 成像系統(tǒng)捕獲的熒光Western Blot圖像示例

那到底怎么選呢,ELISA or Western Blot?


  • 若實驗?zāi)康氖切枰唵巍⒖焖俚卮_定蛋白質(zhì)是否存在,并需要得到精確濃度,ELISA是更好的選擇。

  • 若實驗?zāi)康氖切枰玫礁嚓P(guān)于蛋白質(zhì)的信息,比如分子量、純度、蛋白質(zhì)間相互作用、蛋白質(zhì)表達變化或翻譯后修飾等,則Western Blot更適合。

  • 此外,Western Blot和ELISA檢測的結(jié)果也可相互印證。


(文章來源于儀器網(wǎng))

(來源:


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