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蛋白印跡儀的操作步驟

2025-01-10 09:15:13

蛋白印跡儀主要用于生物樣本的洗滌和孵育,能夠全自動化完成“封閉-洗膜-孵育***抗-洗膜-孵育二抗-洗膜”全過程。通過特定的抗體與蛋白質結合,形成抗原-抗體復合物,進而實現蛋白質的定性和半定量檢測。

 

  操作步驟通常包括:

 

  準備工作:清潔并消毒工作臺,穿戴適當的個人防護裝備,并準備好所有必要的試劑、樣品和耗材。

 

  樣品加載:取出電泳膠片,并將其放置在印跡轉移槽中。將需要測試的蛋白樣品加入到相應孔位中。

 

  膠片轉移:關閉槽蓋后,將印跡轉移槽放置在電泳槽中心位置。設置合適的參數(如時間、溫度等),啟動轉移程序進行蛋白質向膠片上轉移。

 

  洗滌過程:完成蛋白質傳輸后,取出膠片并將其放入洗滌緩沖液中輕輕搖動,以去除未結合的蛋白質和其他雜質。根據實驗需求,可重復該步驟多次。

 

  特異性結合:將膠片放入含有特定抗體的洗滌緩沖液中,并在適當的條件下孵育***段時間,以實現抗原與抗體的特異性結合。

 

  洗凈步驟:將膠片移至新的洗滌緩沖液中進行反復洗凈,在每個洗滌周期結束后換用新的緩沖液。確保完全去除非特異性結合物和雜質。

 

  顯色反應:添加顯色試劑到膠片上,觀察并記錄顏色變化。顯色時間應注意控制,避免過度顯色造成信號失真或影響結果解讀。

 

  停止反應:使用適當的試劑或方法停止酶活性等相關過程。

 

  影像捕獲與分析:使用相應設備(如CCD相機)拍攝膠片圖像,并保存為數字文件。可以使用圖像分析軟件對圖像進行定量和質量評估。

 

  清理工作臺與維護設備:完成操作后,清潔工作臺并處理廢棄物和使用過的耗材。根據制造商提供的指導對設備進行定期維護。


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